Análisis de las propiedades inmunogénicas de las glicoproteínas de envoltura del virus de Distemper Canino expresadas en Pichia Pastoris

Tesis

Doctor en Ciencias Veterinarias. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias 2013

El virus del distemper canino o CDV es un patógeno que afecta a los miembros de la familia Canidae, causando una enfermedad aguda, sistémica y frecuentemente mortal. Predispone al hospedador a las infecciones bacterianas secundarias y a posibles secuelas de tipo neurológico. La protección contra el CDV se logra a través de la vacunación. La mayoría de las vacunas se elaboran a partir de virus atenuado por pasaje en huevos embrionados o cultivos celulares. Sin embargo, estas vacunas han demostrado no proteger completamente contra la enfermedad y en muchos casos, han generado reacciones adversas que sugieren la necesidad del desarrollo de nuevas metodologías para su producción. Teniendo en consideración los avances en biología molecular en relación con la producción de proteínas obtenidas de forma recombinante, se propuso como objetivo expresar y evaluar algunas de las proteínas virales utilizando un sistema heterólogo. Con esta metodología se eliminarían las desventajas de los métodos tradicionales. Además, ayudaría a disminuir notablemente los costos de producción. Se trabajó sobre dos proteínas virales descriptas como el blanco principal de los anticuerpos neutralizantes producidos luego de la infección: la hemaglutina y la proteína de fusión. Ambas proteínas se expresaron en la levafura metiolotrófica Pichia pastoris, obteniéndose las mismas de forma recombinante y en un alto grado de pureza. Luego, estas proteínas se emplearon para inocular ratones con el fin de comprobar su capacidad de estimular la respuesta inmune y analizar su capacidad neutralizante. Los resultados obtenidos sugieren que ambos polipétidos han conservado los determinantes antigénicos presentes en la partícula viral y generaron un buena respuesta inmune, Por lo tanto podrían ser utilizados para el desarrollo de una vacuna a subunidades. Canine distemper virus or CDV is a pathogen which affects members of the canidae family, causing an acute, often fatal systemic disease, predisposing to secondary bacterial infections and neutologic consequences. Protection through vaccination is based on immune system response against viral components. Most of current canine distemper vaccines are made from attenuated virus by passege in eggs or cell culture. Howere, these vaccines have shown not been fully protective against the disease and often generated adverse reactions, suggesting the need to design new vaccines. Consedereing the progress on DNA technology in relationship with the production of recombinant proteins, it might be possible to develop a vaccine obtained from viral proteins wxpresed in an heterologous system. thes will allow the preparation of large amounts of antigen, avoiding the disadvanteges of the tradicional methods and also might significantly decrease porduction costs. To confirm this hypothesis, we were working on two glycoproteins: the hemagglutinin and the fusion protein. Both polypeptides are main target for neutralizating antibodies produced after infection. Both proteins were expressed in the methylotrophic yeast Pichia pastoris, obtained both in recombinant form and in high degree of purity. Later, in order to analyze their immunogenicity, the proteins were used to inoculate mice. The resuts suggested that the polypeptides have maintained the antigenic determinants present in virus particle generating a good immunoresponse and might became relevant for development of a subunit vaccine.